农业农村部公告第682号 那西肽残留检测方法标准.pdf
文档页数：14文档大小：374.25KB文档格式：pdf附件2（略） 附件3（略） 附件4 说明书和标签 一、非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书和内包装标签 (一)非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书 兽用 【兽药名称】 通用名非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒 商品名无 英文名ELISA Kit for Detection of Antibodies Against African Swine Fever Virus 汉语拼音Feizhouzhuwen Bingdu ELISA Kangti Jiance Shijihe 【主要成分与含量】 (1)抗原包被板 2块(96孔/块) (2)阳性对照血清 1管(1.5ml/管) (3)阴性对照血清 1管(1.5ml/管) (4)兔抗猪酶标二抗 2瓶(12ml/瓶) (5)样品稀释液 1瓶(24ml/瓶) (6)20倍浓缩洗涤液 2瓶(50ml/瓶) (7)底物液A 1瓶(12ml/瓶) (8)底物液B 1瓶(12ml/瓶) (9)终止液 1瓶(12ml/瓶) (10)血清稀释板 2块(96孔/块) (11)说明书 1份 【作用与用途】用于检测猪血清中非洲猪瘟病毒抗体. 【用法与判定】 1用法 1.1样品制备取动物全血，待血液凝固后，以3500r/min离心10分钟，收集上清，也可采 集血液，待凝固后自然析出血清，要求血清清亮，无溶血. 1.2洗涤液配制使用前，将20倍浓缩洗涤液恢复至室温，如果有沉淀，37℃水浴使其溶 解，然后用去离子水稀释20倍备用. 1.3样品稀释在血清稀释板中按1：20的比例稀释待检血清(7ul血清133ul样品稀释液)， 阴、阳性对照血清已稀释，可直接使用. 1.4操作步骤 3 1.4.1加样取抗原包被板，将稀释好的待检血清、阴性对照和阳性对照加入到抗原包被板 中，100ul/孔.每份待检血清设1孔，阴性对照和阳性对照各设2孔，加样过程时间跨度应尽量短. 酶标板上对照血清和待检血清添加模式如下所示 1 23456 7 8 9 10 1112 A SI B S2 S3 D S4 E P F P G N H N 注：S1、S2、S3、S4等表示加各待检血清；P:表示加阳性对照血清；N:表示加阴性对照 血清. 1.4.2温育震荡混匀（勿溢出），置37℃温箱内孵育30分钟. 1.4.3洗板弃去反应液，每孔加入洗涤液300l 浸泡15秒，甩弃洗涤液.连续洗板5次 后拍干. 1.4.4加酶各孔加入兔抗猪酶标二抗100ul. 1.4.5温育置37℃温箱内孵育30分钟. 1.4.6洗板弃去反应液，每孔加入洗涤液300l 浸泡15秒，甩弃洗涤液.连续洗板5次 后拍干. 1.4.7显色各孔加入1001底物工作液（将底物液A和底物液B等量混合即为底物工作液， 现用现配)，震荡混匀，置37℃温箱内避光反应15分钟. 1.4.8终止各孔加入显色终止液50ul 振荡混匀终止反应，15分钟内测定结果. 2判定在酶标仪上测各孔OD45mm值. 2.1试验成立的条件是：阳性对照孔0D450mm值应介于0.9~2.0之间，阴性对照孔0D450nm 值均应<0.15； 2.2阳性临界值(Cut-off值)=阳性对照孔OD45onm均值×0.17； 2.3样品0D450nm值≥阳性对照孔0D450nm均值×0.17，判为阳性；样品0D45onm值<阳性对照 孔0D45mm均值×0.15，判为阴性；两者之间判为可疑. 【注意事项】(1)将试剂盒从冷藏环境中取出，置室温平衡30分钟后使用，液体试剂用 前混匀.洗涤液若有结晶析出，轻微加热溶解后不影响使用.为保...
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