NY/T 3446-2019 奶牛短脊椎畸形综合征检测PCR法.pdf
文档页数：6文档大小：1.16MB文档格式：pdfICS65.020.30 B43 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3446-2019 奶牛短脊椎畸形综合征检测PCR法 Detection of brachyspina syndrome in dairy cattle-PCR method 2019-08-01发布 2019-11-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3446-2019 前 标准 品 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则农业 共服务平台 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出.《 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TCV274)归口. 本标准起草单位：农业农村部牛冷冻精液质量监督检验测试中心（北京）、北京奶牛中心、中国农业大 学、农业农村部种畜品质监督检验测试中心、农业农村部牛冷冻精液质量监督检验测试中心（南京）、全国 畜牧总站. 本标准起草人：张晓霞、李艳华、麻柱、刘林、张胜利、房灵昭、韩广文、薛建华、钟代彬、刘丑生、陆汉希、 李姣. I NY/T3446-2019 奶牛短脊椎畸形综合征检测PCR法 1范围 本标准规定了奶牛短脊椎畸形综合征的PCR检测方法. 本标准适用于奶牛短脊椎畸形综合征基因型的分子检测与诊断. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件. 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T27642牛个体及亲子鉴定微卫星 3术语和定义 AR 下列术语和定义适用于本文件 3.1 DNA法BLISHING RE 短脊椎综合征brachyspina syndrome BS 在荷斯坦牛群中发现的隐性遗传缺陷疾病，当缺陷等位基因纯合时才会发病表现出脊椎畸形、明显 缩短，胎儿在妊娠后期流产、死亡等临床症状.该遗传缺陷是由2号染色体上ANC1(fanconi anemia plementation-gro1)基因2527外显子缺失引起的，缺失长度3329p(BTA21:21184870- 21188198) 4原理 RCH 针对FANC1基因缺失的2527外显子，在缺失片段两侧设计特异性PCR引物，进行长片段PCR 扩增，根据PCR产物大小判定个体基因型 5PCR引物 CEN 上游引物BSF:5 GCTCAAGTAGTTAGTTGCTCCACTG-3' 下游引物 BSR:5-ATAAATA- AATAAAGCAGGATGCTGAAA-3;预期扩增片段长度：3738bp/409bp 物位置参见附录A中的 图A.1. 0 6试剂和材料 除非另有说明，在试验中仅使用确认为分析纯的试剂或蒸馏水或去离子水或相当纯度的水. 6.1长片段Tag DNA聚合酶 6.210×PCR缓冲液（含Mg2) 6.3 dNTPs(dATP、dCTP、dGTP、dTTP4种溶液的等比例混合液) 6.4DNA分子量标记 6.5核酸染料 6.6琼脂糖 6.775%乙醇 6.850×TAE缓冲液 取Tris碱242g 冰乙酸57.1mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100mL 加水定容至1000mL 室温 保存. 1 ...
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