SN/T 3446-2012 澳大利亚植原体候选种检疫鉴定方法.pdf
文档页数：12文档大小：3.11MB文档格式：pdfSN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3446-2012 澳大利亚植原体候选种检疫鉴定方法 Detection and identification of Candidatus phytoplasma Australiense 2012-12-12发布 2013-07-01实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 308 SN/T3446-2012 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共 和国辽宁出入境检验检疫局. 本标准主要起草人：牟海青、赵文军、张京宣、王仁睿、朱水芳、段胜男、王有福. I SN/T3446-2012 澳大利亚植原体候选种检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了澳大利亚植原体候选种的检疫鉴定方法. 本标准适用于澳大利亚植原体候选种寄主种苗中的澳大利亚植原体候选种的检疫和鉴定. 2原理 2.1分类地位 澳大利亚植原体候选种(candidatus phytoplasma australiense) 软壁菌门(Tendericutes) 柔膜菌 纲(Mollicuteria) 菌原体目(Mycoplasmatales)非醇原体科(Acholeplasmataceae) 植原体候选属 (candidatus phytoplasma) 16SrXⅡ组植原体. 2.2检测依据 本标准主要采用形态生物学特性与分子生物学技术相结合的方法对澳大利亚植原体候选种进行检 测鉴定. 对植物材料进行症状观察，发现有丛枝、黄化、红叶、卷曲等症状则进行进一步的检测；DAP1荧光 染色方法可以作为一种初步检测植原体的方法；PCR技术结合RFDP技术目前是国际上植原体鉴定分 类的主要方法，在本标准中PCR技术片RF1P技术结合作为鉴定澳犬利亚植原体候选种的准确方法； 电子显微镜观察可以清晰、直观地观察到植原体粒体形态. 3器材与试剂 3.1仪器 PCR仪、超净工作台、灭菌锅、制冰机、核酸蛋白分析仪、高速冷冻离心机，台式小型离心机、超低温 冰箱、常规冰箱、旋涡振荡器、微量进样器、电泳仪、凝胶成像系统、荧光显微镜、电子显微镜. 3.2试剂 DAPI(4' 6-二脒基-2-苯基吲哚)、PCR缓冲液、MgCl2、dNTP、Tag DNA聚合酶、引物等. 4检测与鉴定方法 4.1症状观察 仔细观察种苗是否表现植原体侵染症状，症状描述参见附录A.1. 4.2DAPI染色 选取幼嫩组织（新叶叶梗，枝梢，茎杆及根部韧皮部组织），切片，用1ug/mL DAPI溶液(4'，6-二脒 基-2-苯基吲哚)染色，在460m激发条件，荧光显微镜观察，在韧皮部筛管部位有明显的蓝色荧光信号 1 ...
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