NY/T 2287-2012 省级农产品质量安全监督检验检测中心建设标准.pdf
文档页数：10文档大小：913.41KB文档格式：pdfICS65.020 B16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2287-2012 水稻细菌性条斑病菌检疫检测与鉴定方法 Detection and identification for Xanthomonas oryzae pv. oryzicola(Fang et al.)Swings et al. 2012-12-24发布 2013-03-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T2287-2012 水稻细菌性条斑病菌检疫检测与鉴定方法 1范围 本标准规定了农业植物检疫中水稻细菌性条斑病菌检测鉴定的技术方法. 本标准适用于水稻细菌性条斑病的检测 2规范性引用文件 下列文件对于本文件 注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的弘 员 GB/T6682 GB8371-20 HING GB15569 疫规程 3原理 RES 水稻细菌斑病是 细菌性条斑病 菌的田间症状落 的重要依据. 4试剂与材 刀 无水磷 二 ( 二钾 氢钾(KO4)、碳酸钠 (Na2CO3)、氢钠 CD氯化MC2水亚硫酸钠 (Na2SO2)、氢化4 NaO O)、叠氮化钠 (NaN)、草酸 希售体 售酶标抗体、市 售PCR试剂等 除另有规定 5仪器及用具 31 一级水的规格. 超净工作台、电于毫、磁力搅持 灭锅、养生物 、体式显微镜、小型粉 碎机、高速台式离心机、、电泳 光 R仪、威像系统、冰箱、超低温冰 箱、超纯水器或纯水器、恒温、微量衫等. 6取样方法 6.1叶片取样 田间发现水稻细菌性条斑病典型或疑似症状的叶片时（见附录B) 直接采样检验. 6.2种子取样 对调运中的种子，按照GB15569—2009中6.2的要求抽样. 7检验鉴定 7.1症状识别 在水稻生长期按照GB8371一2009中8.1的要求进行田间调查，与水稻细菌性条斑病为害的典型 症状进行比较（见附录B) 符合典型症状的可进行症状鉴定.如发现疑似症状，可采用常规鉴定、 1 NY/T2287-2012 ELISA检测以及PCR检测. 7.2常规鉴定 7.2.1菌溢检查 切取田间采回的植株叶片病健交界处约20mm2 平放在载玻片的水滴中，加盖玻片后，在低倍显微 镜下观察并记录有无喷菌现象. 7.2.2分离培养 在无菌条件下选取疑似症状叶片病健交界处组织约(3mm~5mm)X(3mm~5mm) 用75%乙醇 表面消毒15s 无菌水清洗2次~3次后放入0.2L无菌水中，用灭菌玻璃棒研碎，在室温下浸泡10 min~30min.将悬浮液在NBY培养基平板上划线：重复3个~5个平板，(27士2)℃培养3d~5d 观 察并记录病原菌形态特征和培养特性（见附录B). 7.2.3革兰氏鉴定 挑取少量分离到的病原菌配制成悬浮液，进行革兰氏染色法染色或3%K0H溶解试验（参见附录 C) 观察记录病菌的形状、大小和染色反应. 7.2.4致病性鉴定 将分离培养得到的纯培养菌株，用无菌水配制细菌悬浮液(10cfu/mL) 用无菌接种针针刺接种于 感病水稻品种叶片中部，每张叶片针刺2个点~3个点，每株接种2片叶~3片叶，接种10株.接种植 株套袋保湿24h 12h光照/黑暗的循环条件下30℃培养，接种48h~72h后观察并记录水稻植株发病 情况. 7.3 ELISA检测 水稻细菌性条斑病ELISA检测程序参见附录D.如采用市售的试剂盒，按说明操作. 7.4PCR检测 水稻细菌性条斑病常规PCR检测程序参见附录E.如采用市售的试剂盒，按说明操作. 8结果判定和报告 8.1结果判定 8.1.1症状识别判定 田间植株发病症状符合附录描述的...
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